就巢性的影响因素

就巢性的影响因素

20世纪70 至80 年代初，国外一些学者开始着手从神经- 内分泌生理的角度研究抱性行为产生的原因和生理过程，结果发现火鸡血浆中的孕酮，黄体生长素（LH）及雌二酮水平与抱性无关，火鸡产蛋到抱性变化过程中PRL 浓度急剧升高并在抱窝期间维持高水平；而LH 在产蛋期随排卵过程波动，抱窝期间维持在低水平。同时，还发现血浆雌二酮，总磷水平与抱性无关；PRL 水平在低抱性品系与高抱性品系的鸡间差异不大，而在抱窝鸡中PRL水平变化极大。雌激素药物比如常用的丙酸睾丸素、睾丸酮、柠檬酸氯酚和他莫昔酚可用来增加血浆促性腺激素的分泌或降低催乳素的分泌。周怀军等 指出柠檬酸氯酚和他莫昔酚可以导致雌禽生殖器官的雄性化。大剂量的孕激素或合成的雄激素可有效的中断就巢，但也延迟了产蛋恢复期。采用促性腺激素释放激素，长时间使用会导致垂体前叶对神经多肽丧失反应。

从内分泌角度看，家禽就巢行为由一系列的激素所控制。产蛋前卵巢分泌大量的雌二酮，这些雌二酮除了刺激卵泡的生长外还作用于脑，使之行为发生改变，接着在雌二酮和孕酮相互作用下，使母禽进入巢内产蛋，进巢行为频率增强，同时催乳素的分泌也逐渐升高，与此同时，Halawani 等 认为下丘脑血管活性多肽（VIP）、5- 羟色胺(5-HT) 和多巴胺（DA）活性增强，进一步促进PRL 的分泌。最终高水平的PRL 使越来越强的进巢产蛋行为固定为抱窝，PRL 是抱窝维持和发展的关键激素。周敏等 对家鸡的PRL 基因结构的研究还表明，引起就巢不同的原因可能是由于其PRL 前体的氨基酸序列中信号肽裂解位点的不同。Jiang 等 研究表明，鸡前垂体分泌的PRL 和GH 是机体非常重要的激素，通过调节就巢行为和免疫反应能够改变鸡的产蛋能力、增长速度和免疫能力。

催乳素对禽类就巢的影响。PRL 是引起家禽就巢最直接的激素，当家禽体内PRL 含量升高后家禽就开始出现就巢表现。据报道，促乳素的含量(μg/腺体)产蛋鸡为3.2，就巢鸡则达6.6。PRL 能够抑制卵泡的发育，当家禽出现就巢时其血液中PRL 的浓度升高，而伴随的是卵泡发育的停止和萎缩。在哺乳动物，催乳素有促进乳汁分泌和维持黄体功能的作用，而在禽类PRL 则起抗性腺的作用。PRL 分泌神经元主要分布在垂体前叶。Proudman[7]的研究显示，PRL 的分泌有一基本的日节律，天亮(开灯)之前出现一峰值，而在天黑(关灯)之前出现一谷值，光照的增强或持续也可引起外周PRL 浓度的升高。在对矮脚鸡不同繁殖阶段的PRL 受体的研究中发现，在下丘脑中，PRL 浓度与tPRL-R 的转录水平呈负相关，而在垂体中却得到相反的结果。表明PRL本身可能通过短反馈机制作用于下丘脑，而通过自分泌或（和）旁分泌作用于垂体参与母鸡就巢的神经内分泌调控。给母鸡注射PRL 可抑制卵泡的生长，使正在发育的卵泡萎缩闭锁；1981 年，首次对就巢的矮脚鸡注射抗鸡催乳素抗体，观察到使体内LH水平升高。

Wong 等发现火鸡垂体催乳素mRNA 和LH mRNA含量在产蛋和就巢期间地变化趋势相反，表明高水平的催乳素抑制了下丘脑GnRH 的分泌，从而使LH 的合成减少。施振旦等等研究发现，在就巢时，将蛋换成乒乓球，甚至将蛋取走，惠阳三黄鸡就巢仍持续50 d 以上，直到将蛋箱取走就巢才停止。Wong等 的研究也表明，禽类PRL 具有分泌嗉囔乳、调节代谢和维持就巢等功能。后来Sharp 实验室克隆了鸡的催乳素基因，对此基因修复后重新克隆于大肠杆菌，表达了23 ku 的催乳素融合蛋白。通过对矮脚鸡主动免疫此融合蛋白，使鸡体内产生催乳素的抗体，每月加强免疫此蛋白，从根本上抑制了矮脚鸡就巢的发生，并提高了产蛋性能。这些研究结果表明，免疫中和PRL 的活性，可以提高其促性腺激素的水平，主动免疫使机体内原性的PRL 失活后，抑制禽类就巢的同时，也维持了生殖系统的功能。

血管活性肠肽对家禽就巢的影响。在禽体内VIP 是一种生理性的催乳素释放因子，它能刺激和调节PRL 的释放。Proudma 等 对火鸡在繁殖周期不同时期的垂体进行培养，并用VIP 进行刺激，观察到VIP 可促进不同时期的火鸡垂体的PRL 的释放 。已有研究显示，VIP 可促进小鼠和猴催乳素的释放 ，主动免疫VIP，可抑制PRL 分泌，降低就巢率并大大提高禽类的产蛋量。通过控制VIP 控制禽类抱窝行为，提高禽类产蛋量，增进经济效益。Sharp 等 最早对就巢的矮脚鸡注射抗VIP 抗体（羊抗VIP 抗体），降低了PRL 的分泌，使矮脚鸡于5 d 内终止就巢。陈峰等 用牛血清蛋白（BSA）作载体与VIP 进行偶联后主动免疫56 周龄的泰和鸡，结果发现泰和鸡抱窝情况减少，产蛋率提高，并且对蛋的受精率和孵化率无影响。在对泰和鸡中用免疫原VIP 类似物-BSA 主动免疫VIP 可减少抱窝的发生，从而提高产蛋率，对受精率和孵化率也无影响 。这些结果说明主动免疫VIP 是目前抑制禽类就巢、提高繁殖性能的最佳方法；但是如果长期注射VIP 容易引起肠道功能紊乱和免疫抑制现象。因此从基因水平研究VIP 对禽类就巢的影响，不仅能提高禽类繁殖性能，也能减少注射VIP 对机体产生的副作用。

5- 羟色胺和多巴胺对禽类就巢行为的影响。下丘脑5- 羟色胺（5-hydroxytrypatamine,5-HT）和多巴胺（Dopamine, DA）这2 种神经递质参与母禽繁殖不同阶段催乳素分泌的调节。5- 羟色胺促进催乳素分泌的作用是通过中枢神经系统或神经肽传递的，而多巴胺在哺乳动物中能直接作用于垂体抑制催乳素的分泌。施振旦等 研究表明，就巢鸡每天口服氯丙嗪150 mg，赛更啶30 mg 可以抑制PRL 的分泌，就巢期从22 d 减至3~5 d，血浆PRL 浓度下降，抱醒效果很好。这说明用DA 和5-HT 受体拮抗剂氯丙嗪和赛更啶处理后，抑制了垂体PRL 的分泌并使鸡终止就巢，在整体水平证明了下丘脑DA 和5-HT 2 种神经递质对就巢发生具有共同的加性促进作用。但是这需要药物的维持，无法完全消除就巢，而且药物还有一定的副作用，会导致受精率和孵化率下降。据1994 年报道，利用多巴胺和5- 羟色胺的受体拮抗剂氯丙噙或赛更啶处理就巢鹅发现可降低催乳素的分泌，使鹅停止就巢。易正戟等 用5-HT 和DA受体处理就巢的家鸡，在处理后第3 天血浆中PRL水平就急剧下降，使家鸡在4～5 d 内终止就巢。 禽类就巢性受基因控制，所以可通过育种途径对就巢性进行控制。从长远来看，培育抗就巢性的禽品种是解决问题的最佳途径。在常规育种中，也可以淘汰就巢性比较强的个体，因为就巢性状的遗传力很低，约为0.116 。常规育种方法对就巢性状的控制进展较慢，并且很难完全消除就巢性。1998 年研究得到了催乳素受体基因的多态性，并认为这是定位就巢性QTL 的极好候选基因。Jiang 等等研究表明，PRL 释放因子2 也是影响就巢的遗传因子之一。

鸡催乳素由30 个氨基酸的信号肽和随后的199个氨基酸的成熟肽组成，在氨基酸序列上与鹅、人、绵羊、兔和鲑鱼的同源性分别为77%、68%、67%、58%和31%。哺乳动物、硬骨鱼和禽有32 个保守的氨基酸残基，主要集中在4 个区域（PD1～PD4）,它与生长激素的4～5 个保守区（GD1、GD2、GD3 和GD5）相对应，被3 个外显子隔开，是催乳素的生物活性区域。在这32 个氨基酸残基中8 个位于PD2和PD4 中，其中4 个丝氨酸是生长激素家族的保守参加。13 个氨基酸残基在4 个区域都存在，也是完全保守的，它们对于催乳素与其特定受体的结合是不可缺少的，决定蛋白质的折叠与构型。虽然鸡催乳素编码区是十分保守的，但在5′侧翼区的24 bp 的插入/ 缺失位点与鸡催乳素表达和就巢行为相关。并且该位点多态与产蛋性能相关。Liang 等 研究了鸡的5′侧翼区催乳素因子的多态性，用中国粤黄鸡、丝骨泰和鸡、来航鸡作为实验动物，测定5′侧翼区催乳素因子的多态性，研究结果表明催乳素多态位点与抱窝性有关。

罗成龙等 研究了鸡催乳素基因多态位点，并以鸡催乳素基因为引物作为鸡就巢行为最主要的候选基因，选用泰和鸡、杏花鸡、固始鸡、隐形白洛克鸡、来航鸡和红色原鸡为材料，通过对鸡催乳素基因的9 个单核苷酸多态性和1 个插入/ 缺失多态性进行群体遗传研究推断出，M5F、24 bp 插入/ 缺失和MI4 位点可能是与产蛋性能有关的候选分析标记。

康乐等 对鸡催乳素基因非编码区4 个位点进行多态性分析，实验用来航鸡、隐形白洛克、白耳黄鸡、固始鸡、杏花鸡、丝羽乌骨鸡、红色原鸡为材料，通过对鸡催乳素基因5′UTR 区24 bp 插入/ 缺失、内含子2 第35 碱基（T/C）位点、内含子3 上有3 bp 插入/ 缺失、内含子4 第1 824 碱基（A/G）位点进行单倍型分析，确定5′UTR 区与内含子2 之间的区域为重组区域，并构建可用于遗传多样性检测和关联分析的有效单倍体。

杜颖军等 根据已经报道的鸡VIP 基因序列设计了4 对引物，以来航鸡、隐形白洛克鸡、杏花鸡、固始鸡和丝羽乌骨鸡为研究材料，利用NDA 池结合测序技术对其部分序列进行SNP 的筛选。结果检测出7 个SNPs，除了一个发生在3′侧翼区外，其他全部分别于内含子区域。

董虹等 对北京鸭活性肠肽基因cDNA 片断进行了克隆与序列分析, 首次成功的运用RT-PCR 法从北京鸭胃肠道扩增VIP 基因片断，从而从基因水平研究VIP 对禽类就巢的影响。

王寿昆等 根据肉鸡和火鸡催乳素基因微卫星序列设计5 对引物进行番鸭催乳素基因微卫星多态性分析，结果表明，5 对引物中有2 对引物可作为PRL 基因的微卫星标记。

刘颖等 根据家鸡催乳素受体基因胞外域序列设计并合成1 对覆盖编码区58-1249 位核苷酸的引物，以家鸡垂体总RNA为模板，对鸡催乳素受体胞外域进行了克隆和原核表达，表达产物可经体积分数为50%的Ni-NTA 凝胶纯化，说明重组蛋白中具有正确的His-tag 标签及之后的鸡催乳素受体编码区胞外域序列。

对影响就巢发生的基因研究表明，这些基因位点与就巢发生和产蛋性能密切相关，这为就巢性状的基因定位和标记辅助旋转奠定了基础，为研究分子遗传机制提供了依据。

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