南美白对虾工厂化养殖中的弧菌，工厂化养殖南美白对虾技术详解

南美白对虾工厂化养殖中的弧菌，工厂化养殖南美白对虾技术详解

南美白对虾工厂化养殖设备

工厂化水产养殖具体形式可分为：流水式工厂化水产养殖、全封闭循环水养殖、循环水水产育苗、水族及海洋馆工程。具有科技含量高、投入高、产出高的特点，被视为现代渔业的代表，也是目前世界水产养殖业的发展方向。

1、流水式工厂化水产养殖

适宜于水源水质较好、换水成本较低的地方。如森林地带中下游，靠近淡水河的地方，或是海岸的岬角地带。由于当地水源无工业污染，水质清澈纯净，微量元素丰富，水量及水质变化不大，可引用河水或海水作为水源，搭建钢结构防风棚，保持进水与排水同时进行，这种叫流水式工厂化水产养殖。亦可保持一定的换水率，增加循环水养殖系统设备对养殖水体进行循环处理，以便使水质变化控制在极小的范围内，这样最有利于水产品的生长，这种形式被称作半流水式工厂化水产养殖。

2、全封闭循环水养殖

适用于优质水资源稀少的地方。如污染严重的城市郊区、海水或淡水河流被严重污染地区、内陆没有海水的地方，可实行全封闭循环水养殖，这种养殖模式对外界环境的依赖性小，系统稳定运行后可持续赢利，但前期土建及设备投入较高。养殖的品种较广，如半滑舌鳎、石斑鱼、南美白对虾、海马、大鲵、罗非鱼等。

3、循环水水产育苗

水产育苗作为水产养殖环节的第一环，水质的好坏直接关系到下游的整个产业链的成败。因此，尽一切可能提高孵化率、减少畸胎及死胎十分重要。而经过系统设备处理后，稳定的水质对于提高育苗的孵化率等起着至关重要的作用。

4、水族及海洋馆工程

水族及海洋馆工程一般都建在城市的繁华地带，自然不能有效利用边远地区的水源，因此，循环水处理成套系统便成了唯一的选择。它的原理同高密度工厂化水产养殖如出一辙。只是养殖密度较小，但却因为要达到较好的观赏效果，对水质的清澈度有更高的要求。

采用工厂化水产养殖可以避免受到环境的影响。循环水养殖方式可充分利用水资源，在水循环净化的过程中，水质清澈，氧气充足，提高了鱼类抵抗病害的能力，并且可适当增加养殖的密度，提高产量。在育苗中，使用工厂化水产养殖的方式，可提高幼苗的成活率。

南美白对虾工厂化育苗及淡化养殖技术

南美白对虾的虾苗培育是在26-28‰的海水中，所以养殖环境也是在相同的海水中，由于现在南美白对虾的全国范围推广，淡水养殖南美白对虾也变成了现实，这时就需将海水培育的虾苗经过人工的驯化最终完全适应淡水养殖，培育出的虾苗就是淡化虾苗，这一技术早在上世纪九十年代末就被应用，现在在我国的大部分地区都实现了南美白对虾的淡化养殖，而且成效显著。

南美白对虾淡水工厂化养殖

（1）分级养殖及放养密度。工厂化高密度养殖采取分级轮养办法，从小苗开始分级养殖，逐渐分疏。具体分三级：第一级：仔虾期（0.8～2.5厘米）放养密度3000尾／平方米。第二级：幼虾期（2.5～6厘米）放养密度1000尾／平方米。第三级：养成期（6～12厘米）放养密度300～500尾／平方米。注意事项：池搬苗时，必须带水搬运；虾长至6厘米后切忌搬运以免受惊死亡。

（2）虾苗选择。工厂化高密度养殖的对虾品种主要是南美白对虾，选购种苗时应注意掌握

①选购好的种苗；

②育苗期间不使用抗生素；

③选择非高温育苗；

④虾苗应规格整齐、透明无脏物、活力强，体长在0.8～1.2厘米。

（3）放养前的准备工作。

①检查放养供气、供水、供热、供电及排污等各个系统运转是否正常。使用高锰酸钾或其他消毒剂对养殖水池、蓄水池储水消毒。

②第一级暂养池注水60厘米，调理各项水质指标使其符合对虾生长要求，施单细胞藻类生长素或生物肥料培育水色，透明度控制在40厘米左右。

③控制水温在26-30℃，比重1.012～1.018后，即可放苗。

（4）投饵管理。虾苗下池后即可投喂饲料。投饵量应根据天气、成活率、残饵量、健康状况、水质环境、蜕壳、用药等情况和生物饵料量来确定。体长0.8～1.5厘米时，用40～60目筛网袋洗料后投喂或直接投喂40～60目的微囊饲料。一日6餐，每万尾虾每餐投喂量为5～15克。1.5～2.5厘米时，投喂0号饲料，一日6餐。每万尾每餐喂15～40克。2.4～3.5厘米时，投喂1号饲料，一日6餐。每万尾每餐喂40～100克。3.5～7.5厘米时，投喂2号饲料，一日4餐。每万尾每餐喂100～800克。7.5～12厘米时，投喂3号饲料，一日4餐。每万尾每餐喂800～1500克。具体可根据饲料检测网内饵料的剩余情况确定投饵量是否应增滅，一般以1～5厘米体长对虾2小时吃完，6～9厘米对虾1.5小时吃完，10～12厘米对虾1小时吃完为好。

平常的养殖户在养殖过程中还有几个要点需要注意：

1.密度较高的池塘，放苗20天内每天黎明前及中午开启空压机2小时，放苗20天后增开水车式增氧机1～2小时，放苗70天后除投饵时暂停1－1.5小时外，全天开启空压机和水车式增氧机。气压低的阴天、下雨时增加开机时间和次数，使水中溶氧量始终维持在4毫克／升以上。

2.科学投喂优质饲料：饲料沿池塘四周进行均匀散投按日投饲第1个月日投4～5次，第2个月3～4次，以后日投3次。经常检查吃食情况，一般以1小时左右吃完为宜，并根据吃食情况、天气情况、虾的生长情况和季节变化，及时调整饲料投喂量。养殖中后期至起捕前可在饲料中加入维生素C、免疫多糖、免疫多肽等添加剂，每日添加1～2次，投饲2天停2天。

3.严格养殖管理：每天巡塘观察对虾吃食、活动情况，及时处理病死虾；定期监测水质，对饲料台、工具进行消毒；严格控制养殖无关人员进出入养殖区域。

4.做好轮捕工作：根据池塘中虾的规格和载虾量，及时做好轮捕工作

南美白对虾工厂化养殖技术规程

什么是工厂化养虾呢?依本人所见，工厂化养虾就是利用现代化工业手段，控制池内生态环境，为对虾创造一个最佳的生存和生长条件，在高密度集约化的放养情况下，促进对虾的顺利生长，

提高单位面积的产量和质量，争取较高的经济效益。具体的讲，就是在具有保温、控光的室内水泥池或塑胶池内，通过太阳能或其它热能把水温控制在养殖生物最适温度；通过充气甚至充氧，

保证池内有充足的溶解氧，不仅供养殖对象呼吸所需，更可改善池内水质条件；通过适量换水，去除水中有害物质，供应和补充有益物质，保持优良的水质条件；通过化学或生物手段，

建立一个优良的生物群落、抑制有害生物，避免严重疾病的发生；以优质的饲料保证对虾生长发育的需要，促进生长和提高抗病力，从而提高对虾的成活率和生长率，提高产品质量和数量，

达到优质、高产和高效之目的。工厂化养虾的优点是产量高、多茬养殖和拓宽上市时间，尤其是疾病容易控制。

南美白对虾室内养殖设备

我们应用PCR技术，放大EHP的18SrRNA基因，再用标记地可辛的探针探测原位杂交细胞中被感染的EHP，最后开发新的PCR技术探测对虾组织，排泄物和水中的EHP。

2.材料和方法

2.1对虾

2006年在文莱收集了感染对虾肠孢子虫（EHP）的南美兰对虾。2014年和2015年在越南虾塘里收集了感染EHP的南美白对虾。2014年，从泰国运送了一批南美兰对虾到我们亚利桑那大学的实验室进行隔离检测，这些对虾后来被检测出感染了EHP，它们的肝胰腺，排泄物和水进行了PCR技术取样检测。

为了检测原位杂交（ISH），并通过PCR技术分析EHP的特异性，研究人员使用了具有棉虾病临床症状的斑节对虾样本，这些对虾来自2005年（固定组织）和2006年（冰冻组织）的马达加斯加。还使用了感染了鳄组织变形虫的南美白对虾，这些虾是在2014年收集到的。通过PCR技术分析，肝胰腺组织或者整只对虾被保护在95%的酒精当中或被风干后送往我们实验室。通过原位杂交技术，用戴维森固定法将虾固定。

2.2.DNA提取

从感染EHP的对虾中去除肝胰腺，（4-5只虾）放进一个样本中。装运感染EHP的对虾的虾槽中对排泄物和水进行了取样。利用MicrosepAdvance离心装置（PALL公司）将虾槽里的水浓缩150倍，用于DNA提取。用一种高纯度DNA模板制备工具（RocheBioscience）或Maxwell-16Cell LEV DNA纯化试剂盒（Promega）。

为了测试EHP引物的特异性，PCR扩增检测两种寄生虫病中的DNA：

（1）棉虾病，2006年从马达加斯加收集了斑节对虾，这些虾的肌肉变白，通过rRNA基因测序，发现它们的DNA呈阴性，因为内有类似于匹里虫的微孢子虫（GenBankkp825331号）；

（2）变形虫病，这些南美白对虾大量死亡，通过组织学检查，最后发现这些虾感染了变形虫（种类不确定）。

为了保证EHP引物没有宿主基因组的反应，制备DNA模板：

（1）来自美国夏威夷的无特定病原（SPF）的南美白对虾（>10样本）、斑节对虾（3个样本）；

（2）来自沙特阿拉伯的印度对虾（2个样本）；

（3）在新喀里多尼亚养殖的南美兰对虾（2个样本）；

（4）来自菲律宾的罗氏沼虾（2个样本）；

（5）沙特阿拉伯附近虾塘里采集的蟹（7个样本，未知的物种）；

（6）多毛类（3个样本），卤虫生物量（9个样本），鱿鱼（2个样本），磷虾（2个样本），这些是从各种商业供应商运送。

2.3.18S rRNA基因扩增和克隆

PCR检测技术，使用了PuReTaqReady-To-Go珠（GE医疗）。扩增18SrRNA基因的引物18S-F（5’-CACCAGGTTGATTCTGCCTGA）和18S-R（5’-TCTGAAATAGTACGGGCGG）。PCR反应中包含200微米dNTP，0.2微米引物，10mM Tris-HCl（pH9.0）,50毫米氯化钾，1.5毫米氯化镁，2.5U Taq DNA聚合酶和1微升提取的DNA（10纳克至100纳克每微升）。放大进行下列循环参数：到达94°C进行初始化3分钟，然后94°C温度下进行30秒，55°C温度下进行30秒，72°C温度下进行1分钟，做35个此循环周期，并在最后一个周期停留在72°C温度下5分钟。在一个含有溴化乙锭的1.2%琼脂糖凝胶中电泳分析PCR产物。在?1KB一带切除和提取DNA，克隆到pGEM-T-easy载体（Promega）上，命名为克隆pEHP-1。通过DNA测序，克隆的插入为1146bp（GenBankNo.kp759285）。国家生物技术信息中心（NCBI）使用BLAST序列数据库对GenBank的相似序列进行了搜索。

2.4、探针标记和原位杂交

克隆pEHP-1质粒DNA被用来做成原位杂交时的一个探针。Mari等人描述，在PCR反应中，使用了digoxigenin-11-dutp（Roche）标记的基因探针（1998）。用于标记反应的引物EHP-F（5’-GGGAACGACGAACGGCTCAG）和EHP-R1（5’-TGCCTTGATGAGACACTGTT）产生一个1.1 kb的片段。digoxigenin标记的DNA探针，用乙醇沉淀，悬浮在水中，并存储在-20°C。棉虾病，感染了类似于匹里虫的微孢子虫的探针如微孢子虫，是从一个克隆的16SRNA基因区域产生。

戴维森的AFA固定虾进行了处理，石蜡包埋，按照标准方法切片（4微米厚）（莱特纳，1996）。经过脱蜡，水化，蛋白酶K消化，和后固定，切片浸泡在用500微升的杂交液中（4×SSC，50%甲酰胺，1×登哈特的溶液，5%硫酸葡聚糖，0.5微克/毫升鲑鱼精DNA），这种杂交液中含有EHP探针含（0.2μg/ml）。切片放在90°C加热表面上10min，然后在42°C温度下进行一夜的杂交。最终采用硝基蓝四氮唑，5-溴-4-磷酸进行检测抗地高辛抗体共轭碱性磷酸酶（罗氏）。

2.5.EHP的PCR检测。

PCR检测技术，使用了PuReTaqReady-To-Go珠（GE医疗）。探测EHP的引物是EHP-510F(5’-GCCTGAGAGATGGCTCCCACGT)和EHP-510R(5’-GCGTACTATCCCCAGAGCCCGA)。放大进行下列循环参数：到达94°C进行初始化3分钟，然后94°C温度下进行30秒，60°C温度下进行30秒，72°C温度下进行30秒，做35个此循环周期，并在最后一个周期停留在72°C温度下5分钟。

3.结论与讨论

3.1临床症状与EHP感染史

目前，养殖对虾过程中所发生的EHP感染还没有特定的的临床症状。EHP感染通常与发育不良和死亡率上升有关。根据越南境内的鱼塘数据（虾农个人提供的数据）：把感染后的虾苗放入虾塘后的前25天时间内，对虾生长速度正常，之后，对虾的健康状况开始恶化；受感染的对虾饲料进食量减少（50-70%），肝胰脏变色。对虾受到感染之后，其体型（即重量，每周进行一次称重）仅为健康对虾的10-40%。对虾EHP感染死亡率并非一成不变，根据养殖场统计，对虾每天的死亡率约为1?2%。在实验室测定过程中，对虾EHP死亡率并无显著上升，（Tangprasittipap，2013），由于测定持续周期较短（7天），有可能无法检测出死亡率的大幅变化。情况较为严重的EHP感染可能会增加其他细菌感染的易感性。我们发现，在某些情况下，EHP通常伴有弧菌机会性感染（也称为感染性肝胰腺坏死），这可能会导致增加对虾死亡率。

南美白对虾养殖场

育种企业：

1、海南：海南禄泰水产种源有限公司

2、广东：粤海、湛江国联、海大三家。

3、湖南：常德家华水产科技有限公司（也是湖南规模最大的对虾养殖企业） 北风就不清楚了！

工厂化南美白对虾养殖投喂

1万尾虾苗投喂量为30-200克

水产知识

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