养殖场培养基灭菌，培养基灭菌后待用
培养基配置灭菌
1、配制溶液
向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。
配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。
2、调节pH值
用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。
3、过滤
用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。
4、分装
已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。
分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。
5、加棉塞
分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。
棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。
6、制作斜面培养基和平板培养基
培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。
(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。
(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。
铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基未长杂菌，即可用来培养微生物。
培养基配置灭菌方法
含 Amp 的 抗性培养基配置方法如下:每 100ml LB 培养液在临高压灭菌前加入 1.5g 琼脂,以 103.4KPa 高压灭菌 20min ,溶液尚未完全冷却时,即应取出培养基,并轻轻摇动以使琼脂均匀分布于整个培养基中。
必须小心,此时培养基溶液可能过热,旋动液体会发生暴沸。应使培养基降温至 50℃,方可加入 Amp ,按每 100ml 培养基加 10mg/ml Amp 溶液 1ml,使其终浓度为 100μg/ml ,然后在超净台上铺平板, 90mm 直径的培养皿约需 25ml 培养基。
培养基配置灭菌使用记录
养菌配好后当天装袋、当天灭菌，如果存放时间长不进行灭菌培养料内的微生物就会在料内发酵生长，从而破坏培养基内的营养成分，并且由于这些微生物的生长过程中分分泌一种或多种毒素从而抑制好菌的生长。
检查无菌的方法：就是将已经灭完菌的菌棒放到25－28℃的恒温环境中避光培养3天后，拿出来检查看袋内有没有杂菌滋生的痕迹。
看菌袋内有没没有导演变色、出现斑点等情况的发生，如果有就证明灭菌不彻底。希望我的回答对您有所帮助。
培养基配置灭菌与接种培养实验报告
计算→称量→溶化→调节pH→分装→加棉塞→包扎→灭菌→搁置斜面计算→称量→溶化→灭菌→倒平板
培养基配置灭菌与接种培养
培养基的配制步骤大方向一般有四步：
选择原料。培养基不同成分的选择，称量，处理（比如琼脂要剪碎，土豆要切块等）
处理原料。如果是固体培养基需要煮培养基，加入不同成分煮沸，分装试剂，液体培养基则溶解装入锥形瓶或者试管。
灭菌处理。一般是湿热灭菌，即在灭菌锅中处理。
倒平板。培养基稍微冷却后倒平板。
培养基配置灭菌验证
培养基的灭菌方法
1、高压蒸汽灭菌：
高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。培养基在爱制备过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在24h内完成灭菌工作。灭菌时一般是在0.105MPa压力下，温度121℃时，灭菌15~30min即可。消毒时间不宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。将蒸馏水或自来水装在三角瓶中，装水量一般不超过瓶的2/3，用牛皮纸或硫酸纸包扎封口，然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。 灭菌后的培养基可放到培养室中预培养3d，若无污染现象，则证明灭菌是彻底的，可以使用。暂时不用的培养基最好置于10℃下保存。含IAA或GA3的培养基应在1周内用完，其他培养基最多也不要超过1个月。
2、过滤灭菌：
一些植物生长调节剂及有机物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇热容易分解，不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌。细菌过滤器与滤膜（孔径0.45微米）使用之前要先进行高压灭菌。过滤后的溶液要立即加入培养基中，若为液体培养基，可在培养基冷却至30℃时加入；若为固体培养基，必须在培养基凝固之前（50-60℃）加入，振荡使溶液与其他成分混合均匀。
扩展资料：培养基有哪些种类
培养基按其组成物质的纯度、状态、用途可分为三大类型。按纯度 合成培养基 是指原料其化学成分明确、稳定的培养基。适合于研究菌种基本代谢和过程的物质变化规律，但是培养基营养单一，价格较高，不适合用于大规模工业生产。 天然培养基 这一类培养基采用天然的原料，所以其原料来源丰富(大多为农副产品)、价格低廉、适于工业。然而原料质量等方面不加控制会影响生产的稳定性。按状态 固体培养基 适合于菌种和孢子的培养和保存，也广泛应用于有子实体的真菌类，如香菇、白木耳等的生产。 半固体培养基 在配好的液体培养基中加入少量的琼脂，一般用量为0.5%～0.8%，主要用于微生物的鉴定。 液体培养基 80%～90%是水，其中配有可溶性的或不溶性的营养成分，是发酵工业大规模使用的培养基。按用途 培养基按其用途可分为孢子(斜面)培养基、种子培养基和发酵培养基三种。
培养基配置灭菌实验报告
对于微生物和植物培养基：
1.计量错误，漏加多加，这是最低级的错误。
2.某些培养基成分必须遵循一定的加入顺序，如磷酸盐和钙盐不可相邻加入，否则沉淀。
3.某些加热易分解的成分如氨基酸、生长激素等不得高温灭菌，只能过滤除菌。
4.铁、铜等易水解的金属盐类添加剂必须与培养基分开灭菌，稍凉再混合。否则会形成沉淀。
4.含葡萄糖的培养基，必须将葡萄糖和培养基分开灭菌后，稍凉再混合。
5.配制平板时加入抗生素时机不对。温度太高抗生素分解，温度太低来不及倒板已经凝固。
6.灭菌完成后必须彻底降温后才能打开锅盖，否则外界空气会进入培养基瓶，带入杂菌。
对于动物细胞培养基
1.动物细胞培养基一般买到是半成品，需要自己添加少数成分（如碳酸氢钠、谷氨酰胺、HEPES等）。添加这些成分一定要选用高的纯度级别（分析纯以上），一旦某瓶药品用于配制培养基，则不能用于其它用途。以防交叉污染。
2.配置动物细胞培养基用的水至少要双蒸水以上的纯度。
3.动物细胞培养基含有多种生物活性物质，不得高温或加热，只能过滤除菌。
4.过滤除菌时，需格外小心滤膜破损。如有破损，全部重滤。
5.调pH时一定要事先校准pH计。
培养基配置灭菌时间
植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。
MS培养基的配制包括以下步骤。培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。大量元素(母液Ⅰ) mg／L NH4NO3 33 000 KNO3 38 000 CaCl2·2H2O 8 800 MgSO4·7H2O 7 400 KH2PO4 3 400 微量元素(母液Ⅱ) KI 166 H3BO3 1 240 MnSO4·4H2O 4 460 ZnSO4·7H2O 1 720 Na2MoO4·2H2O 50 CuSO4·5H2O 5 CoCl2·6H2O 5 铁盐(母液Ⅲ) FeSO4·7H2O 5 560 Na2-EDTA·2H2O 7 460 有机成分(母液Ⅳ) ⅣA 肌醇 20 000 ⅣB 烟酸 100 盐酸吡哆醇(维生素B6) 100 盐酸硫胺素(维生素B1) 100 甘氨酸 400 以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5
培养基配置灭菌过程中的注意事项
培养基的灭菌方法
1、高压蒸汽灭菌：
高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。培养基在爱制备过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在24h内完成灭菌工作。灭菌时一般是在0.105MPa压力下，温度121℃时，灭菌15~30min即可。消毒时间不宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。将蒸馏水或自来水装在三角瓶中，装水量一般不超过瓶的2/3，用牛皮纸或硫酸纸包扎封口，然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。 灭菌后的培养基可放到培养室中预培养3d，若无污染现象，则证明灭菌是彻底的，可以使用。暂时不用的培养基最好置于10℃下保存。含IAA或GA3的培养基应在1周内用完，其他培养基最多也不要超过1个月。
2、过滤灭菌：
一些植物生长调节剂及有机物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇热容易分解，不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌。细菌过滤器与滤膜（孔径0.45微米）使用之前要先进行高压灭菌。过滤后的溶液要立即加入培养基中，若为液体培养基，可在培养基冷却至30℃时加入；若为固体培养基，必须在培养基凝固之前（50-60℃）加入，振荡使溶液与其他成分混合均匀。
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