日本出现大量毒海胆，日本北海道发生赤潮-近九成海胆死亡-海胆的尸体将如何处理

日本北海道发生赤潮，近九成海胆死亡，海胆的尸体将如何处理？

日本北海道发生赤潮，近九成海胆死亡，海胆尸体要及时打捞，及时处理，否则就会产生污染。

1、日本北海道发生赤潮，大部分海胆死亡，未来可能捕捞不到海胆

赤潮是一种非常可怕的现象，海上的蜉蝣生物迅速增长，也就形成了海上赤潮现象，海水都变红，或者变成了其他颜色。因为海面上受到了赤潮现象的影响，所以就造成了氧气缺乏，最直接的就是导致海胆死亡，其他的海产品死亡。据有关专家推测，因为日本北海道发生的这次赤潮，导致大部分海胆死亡，未来可能捕捞不到海胆了。海胆是一种营养价值很高的海产品，日本人非常喜欢吃，如今却因为赤潮导致海胆大量死亡，这也是日本的一个损失。

2、要及时处理这些海胆的尸体

因为日本北海道发生了赤潮现象，所以导致大部分海胆出现了缺氧死亡的现象，要及时处理这些海胆的尸体。因为这些海胆的尸体有毒，所以要及时打捞，及时处理。避免海胆的尸体影响该海域其他的海产品受到污染。与这些海胆一起受影响的还有很多鲑鱼，这些都是因为赤潮影响造成的，日本人对于鲑鱼的需求也很大，所以这次赤潮带来的经济损失不可低估。如果未来5年内都没有海胆可捕捞，就会给那些美食家带来很大的影响，他们吃不到这些美味了。

3、引起赤潮现象的原因

有网友称，引起赤潮现象的原因，日本人应该自己找，他们向大海里排泄核污染的废物，结果导致大量的蜉蝣繁殖，它们的数量增多，就导致出现了赤潮现象。给海胆，鲑鱼以及其他鱼类的氧气越来越少，最后导致大量海胆死亡，大量鲑鱼死亡。保护环境是多么重要的事啊，千万不能向大海里排泄污染物。

日本北海道发生赤潮，近九成海胆死亡，海胆的尸体将如何处理？

日本北海道发生赤潮，近九成海胆死亡，是什么情况？

日本北海道地区出现了非常严重的赤潮现象，作为全世界比较大的一个渔场，北海道地区因为这次赤潮损失惨重，当地的渔民们养殖的海胆有超过九，成都出现了死亡的现象，根据渔民们的说法，这些海胆用手一捏就碎了，这对于靠养殖海产品生活的渔民们来说，是巨大的经济损失，整个北海道地区的海域都出现死亡的海胆遍布沙滩的景象，当地的渔民们可能在以后很长的一段时间之内都没有海产品可以捕捞了。

这些海胆的尸体将如何处理？

这些死去的海胆全部都变成了空壳，铺满了整个北海道地区的海滩，而这些海胆的空壳想要处理起来难度也是非常的大，所以当地的人们只能任由海胆的空壳继续留在海滩上，有部分渔民把这些海胆的空壳捡回去，当作饲料来种花种草，但是绝大多数的海胆也只能在死亡之后被搁置在海滩上。

怎么才能避免这种现象的产生？

日本之所以这次会出现这么严重的赤潮危机，就是因为日本人平时会把一些生活污水和工业污水直接排进海洋当中，这势必会给海洋的水质带来极大的影响，这些污水进入到海洋之后，海水就出现了富营养化藻类，生物就在这样富营养化的环境当中大肆的繁殖，赤潮就这样出现了，藻类会负责在海胆等等一些海产品的表面，这些海产品没有办法呼吸，自然就会出现死亡的情况，所以这是日本人自己带给自己的一次危机。要避免这种现象，只能够通过他们自己，不要再给海里排放各种有害废水，才能够避免这种现象。

海胆的尸体需要及时的进行打捞处理，如果放任不管的话海胆尸体腐烂之后就会造成巨大的水质污染，对北海道附近水域的生态环境造成破坏。

因为海胆有毒，所以最好是处理干净，不让任其漂在海面上，但是此次海胆死亡过多，只有少数被渔民捡回家，剩下的都还继续漂在海上。

回感试验是什么

激发实验主要是检查测定气道的反应性，是主要检测肺功能的一项指标之一。目前常用的是使用吸入激发剂，比如乙酰甲胆碱和组胺类的药物，还有其他的一些变应源，以及单磷酸腺苷、甘露醇、高渗的盐水，还有一些物理激发因素，比如运动、吸入冷空气等作为激发剂。通常通过使用这些激发剂进入人体气道之后，来明确是否出现有肺功能的下降，可以用于诊断支气管哮喘以及慢阻肺等疾病，而且能够明确其病情，及时做出相应的治疗和护理方案。

中间球海胆黑嘴病病原菌的分离与鉴定

刘岩松，张伟杰，王中，殷维骏，欧凡江，田文卓，刘雷，常亚青*

(大连海洋大学农业农村部北方海水增养殖重点实验室，辽宁大连 116023)

摘要: 为确定中间球海胆Strongylocentrotus intermedius黑嘴病的病原，从患黑嘴病中间球海胆体腔液中分离出一株优势菌(记为D1)，通过人工回感试验确定致病性后，对该致病菌进行电镜观察、革兰氏染色、生理生化鉴定和16S rRNA序列比对以鉴定其分类地位，并测定了D1菌株对30种抗生素的敏感性。结果表明：中间球海胆经D1菌株回感后，发病症状与自然状态下患黑嘴病海胆症状相同，并在回感海胆体腔液中分离出相同菌株；D1菌株长×宽为(2.10±0.31)μm×(0.68±0.08)μm，为革兰氏阴性菌；16S rRNA序列比对结果显示，D1菌株与棘皮动物弧菌Vibrio echinoideorum的一致性高达99.04%；生化鉴定结果显示，D1菌株与蔗糖、6% NaCl胨水和氧化酶反应均呈阳性；根据生理生化试验和16S rRNA分子生物学鉴定结果，确定该病原菌为棘皮动物弧菌；药敏试验显示，该菌株对氧氟沙星、多黏霉素B、复方新诺明、氨苄西林和羧苄西林等16种抗菌药物敏感，对麦迪霉素、庆大霉素等11种抗菌药物耐药。研究表明，中间球海胆黑嘴病的病原菌为棘皮动物弧菌，且该菌株对部分抗菌药物不敏感，具有一定的耐药性。

关键词: 中间球海胆；黑嘴病；病原鉴定

中间球海胆Strongylocentrotus intermedius作为一种优质海胆种类，具有生长速度快及生殖腺色泽光亮、质地饱满和味甜等特点。中间球海胆原产于日本北方沿海和俄罗斯远东部分地区沿海，中国自1989年从日本引入该种后，便对其开展了生物学、生态学、人工育苗及遗传育种等一系列研究[1-2]，同时开始进行人工增养殖生产。目前，中间球海胆已成为中国重要的海珍品增养殖种类之一[2]。近年来，海胆逐渐被中国消费者认可，其养殖规模不断扩大，但细菌性疾病如黑嘴病[3]、红斑病[4-5]和病变综合征等[6]也开始在养殖生产中频繁暴发，严重制约了海胆养殖业的健康发展。

黑嘴病是中间球海胆养殖过程中危害最严重的疾病之一。春夏交替时的低温期是黑嘴病频繁暴发的高峰期，且黑嘴病病原菌对受损伤海胆致病性较强[7]，患病海胆的主要特征是围口膜颜色发黑，随着病情逐渐加重，其不能正常进行附着和摄食活动，棘逐渐脱落直至死亡[3]。黑嘴病传染性强，死亡率高，在中间球海胆养殖过程中危害较大，因此，开展黑嘴病病原的分离和鉴定及病原菌病原特性的研究，对有效防控中间球海胆黑嘴病具有重要意义。目前，已有研究对中间球海胆黑嘴病致病菌的鉴定尚有争议。Takeuchi等[8]从患黑嘴病中间球海胆中分离出一种菌株，根据病原菌的生化特性、DNA-DNA同源性和血清学分析，证明该病原菌为弧菌属Vibrio；而李太武等[3]根据该病原菌的形态特征及生化特性，鉴定中间球海胆黑嘴病的病原菌为坚强芽孢杆菌Bacillus firmus。原因可能是黑嘴病的病原菌有多种，导致分离出的致病菌种类不一，也可能是因为试验方法及鉴定方法不同，导致结果出现分歧。鉴于目前细菌鉴定技术的不断进步，有必要对黑嘴病病原菌进行重新鉴定。本研究中，对患有黑嘴病的中间球海胆进行了病原菌分离纯化，并采用电镜观察、革兰氏染色、生理生化鉴定和16S rRNA序列比对等系列手段对该病原进行了鉴定，以期为海胆黑嘴病的防治提供科学参考。

1 材料与方法

1.1 材料

试验用患病及健康中间球海胆均取自大连海洋大学农业农村部北方海水增养殖重点实验室同批人工繁育群体，挑选具有典型黑嘴病病症的个体作为病原分离的试验材料。

抗菌药物药敏纸片购自杭州微生物试剂有限公司；细菌微量鉴定管购自海博生物技术有限公司；2216E培养基、无菌接种环和PBS试剂均购自生工生物工程(上海)股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 病原菌的分离与纯化在无菌条件下，对具有典型黑嘴病病症的中间球海胆进行解剖，吸取其体腔液于2216E固体培养基上进行划线分离，在16 ℃下恒温培养12 h后，对菌落形态、大小和颜色等进行观察比较，挑取优势菌落进行纯化培养，将菌液与体积分数为80%的甘油按体积比1∶1混合均匀后置于-80 ℃下保存备用，分离的细菌编号为D1。

1.2.2 人工回感试验采用浸泡法进行人工回归感染试验，随机取200只健康无病症的中间球海胆，等分放入4个10 L灭菌水槽中，暂养3 d后开始试验，使用1 mL无菌注射器针头从海胆围口膜处刺入造成损伤后，向水槽中加入10 μL浓度为108 cfu/mL的D1菌液，最终浸泡胁迫浓度为 102 cfu/mL，对照组仅使用针头损伤海胆，养殖于无菌海水中。试验期间保持水温为(17±1)℃，连续观察7 d并记录试验海胆的发病症状及死亡情况。

1.2.3 病原菌形态观察将纯化后的病原菌涂布在载玻片上，经火焰固定，随后分别加结晶紫染液1 min后水洗、碘液1 min后水洗、脱色液1 min后水洗及复染液30 min后水洗，晾干后进行镜检。

取10 mL浓度为109 cfu/mL的D1菌液离心(3 000 g)，去除上清液，加入5 mL 0.1 mol/L PBS清洗，清洗3次后加入5 mL体积分数为2.5%的戊二醛固定3 h，用PBS清洗2次，用纯水清洗2次，再用体积分数为30%、50%、70%、80%、90%和100%的乙醇溶液梯度脱水，最后滴加处理好的样品于1 cm×1 cm的贝壳上，置于烘箱中进行烘干，样品充分干燥后进行扫描电镜观察。

1.2.4 病原菌生化特征鉴定将分离株D1接种于2216E固体培养基上，在16 ℃下恒温培养24 h，用无菌接种环挑取适量单菌落接种于细菌微量鉴定管中，用无菌封口膜封口，在37 ℃下恒温培养。

1.2.5 病原菌分子生物学鉴定将新鲜培养的单菌落挑取至2216E液体培养基中，于16 ℃下恒温培养12 h后，取1 μL稀释5倍作为模板。利用通用引物(引物序列为8F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG，1492R：GGTTACCTTGTTACGACTT)扩增16S rRNA基因全长。反应体系(共50 μL)：正、反向引物各2 μL，DNA模板1 μL，rTaq 0.4 μL，dNTP Mixture 4 μL，10×PCR Buffer 5 μL，用无菌水补足至50 μL。反应条件：94 ℃下预变性5 min；94 ℃下变性30 s，43.6 ℃下退火30 s，72 ℃下延伸1 min，共进行35个循环；最后再在72 ℃下延伸10 min。将所得未纯化PCR产物送至生工生物工程(上海)股份有限公司测序。运用MEGA X软件将返回的D1菌株16S rRNA基因扩增序列进行拼接，得到全长后在Ezbio Cloud数据库中进行多序列比对。将EzBio Cloud数据库中与D1菌株的16S rRNA基因序列相似度较高的几种常见致病弧菌，用MEGA X软件进行比对，并采用邻接法(NJ)构建系统发育树, 以自举数据集为1 000次的自举分析(bootstrap)进行置信度检测。

1.2.6 药敏试验对病原菌D1运用药敏纸片扩散法进行药敏试验。取200 μL新鲜菌液涂布于2216E固体培养基上，将药敏纸片用无菌镊子贴于涂布新鲜菌液的培养基表面，在16 ℃下恒温培养24 h，根据杭州微生物试剂有限公司提供的《药敏试验纸片法的抑菌范围解释标准》，通过测定抑菌圈直径确定病原菌株的药物敏感性。

2 结果与分析

2.1 病原菌分离纯化

从图1可见，从患病中间球海胆中提取的优势病原菌D1在2216E培养基上培养12 h(16 ℃)后，菌落呈圆形、乳白色、不透明。

2.2 人工回感试验

人工回感试验发现，海胆在感染48 h内出现围口膜变黑，管足回缩，附着能力丧失，运动能力减弱等病症(图2)，与自然发病的海胆症状相同。从表1可见：感染后的海胆在48 h后开始出现死亡，第8天时3组的平均死亡率为30.67%±1.15%；对照组海胆损伤后置入无菌海水中暂养，并未发生病状。同时，再次从人工感染的发病海胆中进行优势菌分离，用二次分离到的菌株感染健康海胆，出现的海胆黑嘴病症状与自然发病症状相同，16S rRNA序列比对结果均与菌株D1一致。这表明，菌株D1为中间球海胆黑嘴病病原。

你好，针对于你的问题回感试验其实就是利用组织切片及免疫组化技术对感染动物的的肝脏、脾脏、肾脏及其他组织进行了组织病理切片,并进行HE染色和免疫组化分析的一种实验方法。

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稻蟹综合种养新模式试验

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稻蟹综合种养新模式试验

_李小进等

蟹综合种养在辽宁省稻渔综合种养中占据重要地位，是辽宁省渔业优势产业。根据辽宁省渔业统计年报，2020年辽宁省稻渔综合养殖面积100万亩，河蟹产量5.5万t。为保障粮食安全和促进农业增收，贯彻农业农村部等十部委《关于加快推进水产养殖业绿色发展的若干意见》，辽宁省农业农村厅制定了《辽宁省加快推进稻渔综合种养发展指导意见》，每年拿出专项资金支持产业推进，计划到“十四五”末，辽宁省稻渔综合种养面积发展到150万亩。为保证这个目标实现，团队针对辽宁省稻蟹综合种养比较效益不高的问题开展探索研究，寻找适用本地的方法，助推辽宁省稻渔综合种养业发展。

技术路线

本试验在水稻不减产的情况下，以增加河蟹收益来提高稻田的综合收益。试验采用稻田成蟹扣蟹混养模式，稻田面积100亩，其中80亩养成蟹，20亩养扣蟹。扣蟹养殖选择优质蟹苗“光合1号”，成蟹采用80%母蟹+20%公蟹模式，以提高稻蟹养殖的经济效益。常规模式是稻田养殖成蟹，母蟹和公蟹各占一半。新模式相对常规模式，增加的收益一部分来自扣蟹高于成蟹产量的价值，另一部分来自于母蟹高于公蟹售价的价值。

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